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色譜分析時(shí)操作技巧

更新時(shí)間:2016-09-14      點(diǎn)擊次數:2931

液相溶劑瓶小改進(jìn):

     液相溶劑瓶原裝蓋上有兩個(gè)小孔,一直擔心空氣當中的懸浮顆粒會(huì )落入瓶中,污染流動(dòng)相,為了避免污染,又防止出現內外壓差,對溶劑瓶做了如下小改進(jìn)。

一、大一點(diǎn)的孔用一次性針筒過(guò)濾頭堵上,另一小孔則先將一次性針筒過(guò)濾頭套入一個(gè)塑料槍頭再插入。

二、裝水相的和有機相的溶劑瓶,分別選用無(wú)機相的和有機相的一次性針筒過(guò)濾頭。

三、我曾經(jīng)用空針筒套上過(guò)濾頭推拉空氣,測試無(wú)明顯阻力,用在溶劑瓶上應該不會(huì )產(chǎn)生內外壓差。

四、每三個(gè)月就更換一次,保證過(guò)濾空氣效果,改進(jìn)兩年多來(lái)對液相運行無(wú)影響。

 

 毛細管電泳法操作經(jīng)驗

  1 斷流的可能原因

 a、有氣泡。解決辦法:所有進(jìn)入毛細管的液體都要超聲排氣,特別是容易起氣泡的溶液,如SDS。

  b、有沉淀物。解決辦法:所有進(jìn)入毛細管的液體都要過(guò)濾,濾膜孔徑要比毛細管內徑小。

 c、毛細管有裂口,zui容易裂的地方是窗口處和毛細管出口端,有時(shí)候看不出來(lái),因為加壓注水的時(shí)候仍能看到液滴出來(lái),需要用手碰一碰才能發(fā)現。

 

2 基線(xiàn)漂移

 a、毛細管沒(méi)活化好:需要用0.1 M氫氧化鈉多沖一沖

  b、毛細管沒(méi)平衡好:沖完氫氧化鈉和水后需要用buffer再沖一段時(shí)間,這個(gè)時(shí)間得根據buffer的組成而定。必要時(shí)候需要跑空白一段時(shí)間。

  c、燈接近壽命:查看燈的使用時(shí)間,如果已經(jīng)兩千多個(gè)小時(shí)接近三千小時(shí)的話(huà),可以考慮換燈了。

 d、毛細管壽命已到。毛細管是有使用壽命的,要看怎么保養,當然,還跟使用的buffer有關(guān)。有些buffer特別傷管子的。

 

3 常見(jiàn)緩沖溶液的使用

  緩沖溶液一般是先配好stock solution,使用的時(shí)候再進(jìn)行稀釋。但是stock solution也不能長(cháng)時(shí)間存放,0.1 M 的磷酸、硼砂等溶液常溫下一個(gè)星期就會(huì )有變化,再長(cháng)時(shí)間可以看到有沉淀析出。但是也不能因此放到冰箱去,因為放到冰箱也會(huì )有沉淀析出,常溫存放,然后每星期重配一次。另外,配置硼砂的時(shí)候要稍微加熱幫助溶解,不然溶解不了。但加熱也不要太猛烈,不然溶解效果也是不好。

4 sds使用注意事項

sds在配置過(guò)程中容易產(chǎn)生氣泡,所以如果用容量瓶來(lái)配置是不實(shí)際的。這時(shí)候就不能對sds的濃度做要求。所以,一般用量筒或者離心管配置就好了,加水的時(shí)候用玻棒引流,小心的攪拌,邊配置邊超聲促進(jìn)溶解。

5 毛細管的使用和維護

避免用強堿溶液長(cháng)時(shí)間沖洗,比如1 M氫氧化鈉,內壁會(huì )被腐蝕的。長(cháng)時(shí)間不用的時(shí)候應該吹干,兩端密封保存。也有人建議用水封存。

6 UV燈的使用注意事項

不要暴力關(guān)電,要在操作界面按關(guān)燈鍵。一般不超過(guò)兩小時(shí)暫停檢測不需要關(guān)燈,因為開(kāi)關(guān)燈都是會(huì )對燈造成損害的。

 

 

色譜柱的清洗和修補技巧

  1:用色譜甲醇做流動(dòng)相,以1.00ml/min的流速,反向(只適用于色譜柱兩端封口一致的色譜柱)沖洗一小時(shí),不接檢測器。

2:用異丙醇,以0.3ml/min的流速,反向沖洗三小時(shí)

3:再用甲醇,以1.00ml/min的流速,反向沖洗30分鐘。

4:連接檢測器,正向連接色譜柱,用流動(dòng)性過(guò)渡,

5:基線(xiàn)平穩后,進(jìn)樣。進(jìn)樣色譜圖。

  采取措施:

1:挖去柱頭污染的填料,大約1.5mm,挖去的污染填料。

2:用同種填料,濕法填平挖去的柱頭填料,篩板用異丙醇超聲15分鐘,再用水超聲5分鐘,用濾紙擦干,上好柱頭螺絲。

3:流動(dòng)相沖洗30分鐘,不連接檢測器。

4:連接檢測器,過(guò)渡平衡,進(jìn)樣。

結論:根據色譜柱出現柱效降低,分離效果不好,嚴重拖尾,影響正常檢測的情況,進(jìn)行了反向沖洗,以及修補,效果還是可以的,再者:對于使用效果不好的色譜柱,要根據情況作相應的處理,如果通過(guò)清洗能解決問(wèn)題的一般不要修補,清洗不能達到使用效果的再進(jìn)行修補。

 

進(jìn)樣針堵塞疏通技巧

    實(shí)驗室的氣相色譜分析時(shí),進(jìn)樣針堵塞是zui常見(jiàn)的問(wèn)題了,前幾天做實(shí)驗,載氣流速都正常,柱子也剛老化過(guò),出峰變低,懷疑是進(jìn)樣針有點(diǎn)兒堵了,燒了個(gè)熱水,用開(kāi)水把進(jìn)樣針的針頭給燙一下,然后再用針吸幾下熱水,完了之后再進(jìn)樣試試, 發(fā)現進(jìn)樣還算正常了!用開(kāi)水煮的話(huà)可能效果會(huì )更好!

 

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